1、不同浓度(密度)percoll分离液的制备: 先用9份percoll分离液与1份8.5% nacl或1.5mpbs混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85% nacl或0.15m pbs)稀释到所需浓度。

　　2、不连续密度梯度percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层percoll比重相差不大时，可将percoll液放入中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

　　3、装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

　　4、离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

　　5、取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除percoll液后收集界位的细胞;有时大部分细胞位于percoll层中,则需要逐层收集。收获含有percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

　　适合分离细胞，亚细胞成分和大(>70s)，渗透压均匀，粘度低，可调生理离子强度和ph，分离条件温和，对细胞性，可以灭菌消毒。

　　percoll分离液是一种经过处理过的硅胶颗粒，经过高速离心后可形成连续密度梯度，由于percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。percoll分离液采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分数十分钟内达到满意的细胞分离结果。此外，percoll分离液透生物膜，对细胞，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分，还可将受损细胞及其碎片与完好的分离。percoll常用于分离和传话植物原生质体、核、叶绿体、和线粒体。

　　percoll细胞分离液

　　percoll渗透性低、透细胞、密度高、，是目前较理想的介质。percoll密度梯度离心已被多次成功地用于动物细胞及其细胞器的分离，纯化了包括人***细胞、***细胞、红血球细胞、白血球细胞、淋巴细胞、肝细胞等在内的十余种动物细胞。

　　1、不同浓度(密度)percoll分离液的制备: 先用9份percoll分离液与1份8.5% nacl混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85% nacl)稀释到所需浓度。

　　2、不连续密度梯度percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头***从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层percoll比重相差不大时，可将percoll液放入***中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

　　3、装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

　　4、离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

　　5、取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除percoll液后收集界位的细胞;有时大部分细胞位于percoll层中,则需要逐层收集。收获含有percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

　　优点：

　　percoll渗透性低、透细胞、密度高、是目前较理想的介质。percoll密度梯度离心已被多次成功地用于动物细胞及其细胞器的分离，纯化了包括人红血球细胞、白血球细胞、淋巴细胞、肝细胞等在内的十余种动物细胞。

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